外周血单个核细胞

外周血中具有单个核的细胞

外周血单个核细胞（Peripheral blood mononuclear cell,PBMC)是外周血中具有单个核的细胞，包括淋巴细胞和单核细胞。注意这里是 mononuclear cell 单个核细胞，而不是 Monocyte 单核细胞。外周血单个核细胞主要的分离方法是Ficoll-hypaque（聚蔗糖－泛影葡胺）密度梯度离心法。

简介

外周血单个核细胞包括淋巴细胞和单核细胞。单个核细胞的体积、形态和比重与外周血其他细胞不同，红细胞和多核白细胞的比重在1.092左右，单个核细胞的比重为1.075-1.090，血小板为1.030-1.035。因此利用一种介于1.075-1.092之间而近于等渗的溶液作密度梯度离心，使一定密度的细胞按相应密度梯度分布，可将各种血细胞与单个核细胞分离。

分离

一、基本原理

外周血单个核细胞包括淋巴细胞和单核细胞，其比重为1.070左右，而红细胞和多核白细胞的比重超过1.080。这样利用介于两者比重之间的溶液(称为分层液)做密度梯度离心，就可得到单个核细胞。最常用的分层液为聚蔗糖和泛影酸钠混合比重为1.070±0.001的溶液，国内常用泛影葡胺代替泛影酸钠。

二、试剂与器材

1、聚蔗糖—泛影葡胺分层液，Hank’s液，RPMI-1640培养液，肝素。

2、水平离心机。

三、操作步骤

1、取外周静脉血，用肝素抗凝，加等量的Hank’s液并混匀。

2、将分层液加入试管中，用量约为血量的1/2。用吸管沿管壁缓缓将血加入分层液面上。

3、置于水平离心机离心，1500r/min，10min。可见绝大多数单个核细胞悬浮于血浆和分层液的界面，呈白膜状。

4、用尖吸管吸取界面的细胞层，置于另一试管中，加入适量的Hank's液，混匀后以1000r/min，离心10min，弃上清。

5、同法洗涤细胞2次。

6、将细胞重悬于RPMI-1640培养液中，4℃保存备用。

四、注意事项

1、在分离外周血单个核细胞过程中，将稀释血液加于分层液上时，要避免冲散分层液面，而要使之形成良好的界面，否则影响分离结果。

2、此法操作得当，单个核细胞得率可达80%-90%，影响得率最重要的因素是分层液的比重。

淋巴细胞

淋巴细胞来源于造血干细胞(hemopoietic stem cell，HSC)。造血干细胞可分化成多能前体细胞( multipotent progenitor cell，MPC)，继而分化为淋巴样干细胞和髓样干细胞。淋巴样干细胞可继续发育为成熟的T淋巴细胞、B淋巴细胞和NK细胞等。骨髓、胸腺造血微环境是造血干细胞分化发育的主要场所。

单个核细胞

单个核细胞是血液白细胞中具有单个核细胞的一个含糊术语。以淋巴细胞为主，也包括少数单核细胞、浆细胞等。外周血中单个核细胞的相对密度在1.076-1.090之间，常用相对密度1.077±0.001聚蔗糖-泛影葡胺作密度梯度离心加以分离。

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