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VP试验

生化反应

VP试验由Voges和Proskauer两位学者创建，故有此学名。它是微生物检验中常用的生化反应之一。其原理为：某些细菌能分解葡萄糖产生丙酮酸，并进一步将丙酮酸脱羧成为乙酰甲基甲醇，后面在碱性环境下被空气中的氧氧化成为二乙酰，进而与培养基中的精氨酸等所含的胍基结合，形成红色的化合物，即VP试验阳性。

试剂
1.葡萄糖蛋白胨水培养基成分：多价蛋白胨7g、葡萄糖5g、磷酸氢二钾5g、蒸馏水1000ml，pH 7.2。
2.制备：将上述成分混合溶解后，分装于小试管，115℃高压灭菌15 min。
3.试剂：甲液为6%a萘酚乙醇溶液；乙液为40%氢氧化钾溶液。
试验方法
1.O’Meara氏法：将试验菌接种于通用培养基，于36±1°C培养48h，培养液1ml加O’Meara试剂（加有0.3%肌酸Creatine或肌酸酐Creatinine的40%氢氧化钠水溶液）1ml，摇动试管1~2min，静置于室温或36±1°C恒温箱，若4h内不呈现伊红、即判定为阴性。亦有主张在48~50°C水浴放置2h后判定结果者。
2.Barritt氏法：将试验菌接种于通用培养基，于36±1°C培养4天、培养液2.5ml先加入5°Cα萘酚（2-na-phthol）纯酒精溶液0.6ml，再加40%氢氧化钾水溶液0.2ml，摇动2~5min，阳性菌常立即呈现红色，若无红色出现，静置于室温或36±1°C恒温箱，如2h内仍不显现红色、可判定为阴性。
3.快速法：将0.5%肌酸溶液2滴放于小试管中、挑取产酸反应的三糖铁琼脂斜面培养物一接种环，乳化接种于其中，加入5%α-萘酚3滴，40%氢氧化钠水溶液2滴，振动后放置5min，判定结果。不产酸的培养物不能使用。
质量控制
大肠埃希菌ATCC 25922为无红色出现，肺炎克雷伯菌ATCC 13883为红色。
结果判断
呈红色者为阳性。
注意事项
1.许多实验室工作人员有一个错误的印象，即VP试验阳性菌甲基红试验自然是阴性，或反之亦然。实际上，肠杆菌科的大多数细菌产生相反的反应（由于乙酰甲基甲醇形成碱性，导致甲基红试验阴性和VP试验阳性）。某些细菌如蜂房哈夫尼菌和奇异变形杆菌35℃培养可产生甲基红试验和VP试验同时阳性反应，后者常延迟出现。
2.a萘酚乙醇溶液易失效，试剂放室温Ⅱ音处可保存1个月。氢氧化钾溶液可长期保存。国内多采用贝氏法。
用途
本试验常与甲基红试验一起使用，因为前者为阳性的细菌，后者通常为阴性，反之亦大肠埃希菌、沙门菌等甲基红试验呈阳性反应，而VP试验则为阴性；相反，如沙雷菌、阴VP试验阳性，而甲基红试验为阴性。
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