乳胶凝集法

以乳胶颗粒作为载体的间接凝集试验

乳胶凝集法( Latex agglutination test，LAT) 是以乳胶颗粒作为载体的一种间接凝集试验。即吸附可溶性抗原于其表面，特异性抗体与之结合后，可产生凝集反应。这种方法具有独特优点: 不需要特殊仪器、肉眼判断、操作简便、不需要专门培训；检测时间短，一般为 2 min；价格低廉，检测单份血清样品的成本比其它血清学和病原学方法低得多；适于现场检测等，在临床检验中被广泛应用。

乳胶凝集法

普通聚苯乙烯乳胶和抗体的结合是无选择性的物理静电吸附，抗体很难结合到乳胶表面，即使致敏上的抗体也容易从乳胶微球上脱落或者变性失活，而使用多肽缩合剂或交联剂则操作过程繁琐、耗时。研究以带有磺酸基的三元聚合物乳胶微球为载体,获得单分散性好的乳胶，通过调节 p H 值后乳胶微球表面带有较多的电荷，易吸附抗体。将单克隆抗体吸附到乳胶表面，制备乳胶抗体复合物诊断试剂。这种方法克服了普通乳胶致敏抗体的缺点，不需使用交联剂，提高了抗体的结合效率，而且致敏上的抗体不容易从乳胶上脱落，进而提高乳胶的敏感性和保质期，适合产品开发和大规模生产的要求。

乳胶凝集法的应用

乳胶凝集法可用于猪圆环病毒的快速检测。本方法在实际应用方面具有显著的优势: 灵敏度高、特异性强、检测成本低、操作简便、快速、结果稳定。同其它检测方法相比，本方法不需要专业技术，检测耗时短，更适用于PCV2 的早期诊断和大规模的临床检测，对减少养猪业的损失意义重大。

乳胶凝集法还可快速检出耐甲氧西林金黄色葡萄球菌（MRSA），这对临床及时使用有效的药物进行治疗，防止院内交叉感染有重要指导意义。苯唑西林盐琼脂筛选平皿法检出MRSA需要一到两天的时间，而PBP-2a乳胶凝集法检出一例MRSA只需不到30分钟的时间，其原理是加热裂解将MRSA中的PBP-2a提取出来，加入PBP-2a特异性单克隆抗体致敏的乳胶颗粒溶液，出现肉眼可见的特异性凝集现象。本实验中两种方法的实验结果符合率为100%，说明PBP-2a乳胶凝集法完全可以作为临床微生物实验室快速筛查 MRSA 的方法。

乳胶凝集法在检测麻疹病毒Ig-M抗体也有较好应用。由于非特异的前驱症状和轻型麻疹病例的存在,仅依据临床表现诊断麻疹是不可靠的。随着麻疹发病的减少,许多临床医师未见过麻疹或无诊断麻疹的经验。急需实验室诊断方法来鉴别麻疹和与其临床表现相类似的其它疾病。麻疹在婴幼儿中的误诊更常见,爆发的病例比散发病例更需要实验室的确认。与麻疹相似的疾病很多,例如:风疹、登革热、埃柯、柯萨奇、人类小脱氧核糖核酸(DNA)病毒B19、疱疹6型病毒等感染引起的疾病[8]。间接ELISA法比捕捉ELISA法的实验流程简单,该法已被一些国家广泛应用。但间接法血清需预处理,吸去IgG抗体,问题是IgG抗体吸附不完全时,可导致结果不可信。麻疹IgM抗体捕捉ELISA法和噬斑减少中和实验相比,在检测疫苗免疫后婴儿IgM抗体敏感性达到97%。在临床证实的病例中,捕捉法的敏感性和特异性分别达到91.8%和98.2%[8]。阳性和阴性的可信度分别为98.2%和92.0%。市场上有许多种ELISA法捕捉IgM抗体试剂盒,但质量差别很大,不是所有的试剂盒都能达到高敏感性和特异性。

乳胶凝集IgM-PA法、捕捉ELISA法和间接ELISA法都只需要1份血清即可诊断病例,ELISA法已大量用于麻疹的实验室诊断。结果提示,三种方法检测麻疹可疑病例的阳性检出率相似,差异无显著的统计学意义。IgM-PA法检测麻疹可疑病例的敏感性为100%,特异性为90%。检测正常儿童血清的特异性为100%,可能IgM-PA法比ELISA法更敏感,可检测出麻疹可疑病例中的微量抗体。IgM-PA法实际应用时,只做4个滴度定性即可。一块96孔酶标免疫板上可做24份标本,使成本降低。PA法不需要特别的仪器设备,操作简单,不需特别的技术和培训,酶标板可重复使用,结果快速。IgM-PA法易在地区和县级疾病预防控制机构开展,利于全国麻疹实验室网络的建设。

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