鱼类传染性脾肾坏死病

鱼类一种传染性、病毒性疾病

鱼类传染性脾肾坏死病（Infectiousspleen and kidney necrosis，简称ISKN）俗称鳜暴发性出血病，是由传染性脾肾坏死病毒（Infectious spleen and kidney necrosis virus，简称ISKNV）引起、发生在鱼类身上的一种病害。病鱼缺氧、身体失去平衡、应激反应减低，体表变黑、出血，鳃苍白，剖检发现脾脏和肾脏肿大，肝脏上有出血点等。

病害学史

自从1997年首次从鳜鱼上发现报道ISKNV以来，该病已经在中国大部分的地方被确诊。

在韩国、朝鲜、马来西亚、菲律宾、泰国、日本和新加坡等亚洲国家也有发病案例，甚至已通过水产品贸易传入加拿大、澳大利亚、德国等地。

病原特征

传染性脾肾坏死病毒在透射电镜下观察为六边形，直径为150纳米，病毒粒子在细胞质中装配，成熟病毒粒子在胞质中积聚星晶格状排列；福尔根染色和吖啶橙染色显示为双链DNA病毒；病毒有囊膜，对热（50℃，30分钟）、酸碱性和紫外线敏感，处理后病毒失去致病力。根据形态结构、理化特性和生物学特性，进一步证实ISKNV为虹彩病毒（Iridovirus）。四种化学试剂：高锰酸钾、甲醛、碘和次氯酸钠中，次氯酸钠对病毒的灭活效果最好，高锰酸钾和甲醛次之，碘在试验的浓度范围内对病毒没有灭活作用，因此建议生产实际中多用含氯的消毒剂预防鱼类传染性脾肾坏死病。

成熟二十面体病毒体，显示外囊和内膜的细节，中心电子透明核心。

为害症状

病鱼身体失去平衡，易离群漫游，同时有缺氧症状。鳃盖、口腔周围、下领、胸绪、腹充血（图1），偶尔还伴有眼球突出症状，鳃丝失血发白，时常伴有烂鳃及寄生虫感染（图2），容易引起误诊。解剖后腹腔内常伴有腹水，肝脏呈现白色，有出血点，肾脾肿大，有的能看见明显的出血点（图3）。肠内充满黄色物质（图4）。

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流行情况

病毒通过腹腔注射、肌肉注射、划痕浸泡、浸泡、同池浸泡和口服等6种途径感染，引起发病死亡。肌肉感染的发病潜伏时间最短，为7天；腹腔注射感染为8天浸泡、划痕浸泡和同池浸泡都为9天：口服感染的时间最长为22天。病毒感染后，发病鱼通过体表出血、尿液和类便等方式将病毒排放到环境水体中。鱼类传染性脾肾坏死病毒病的主要通过水体传播。

具有明显的季节性

28~30℃是该病的最适流行水温，水温在20℃以下很少发病。该病在宝应地区主要发生在6月下旬至10月上旬（期间高温阶段有暂停期）11月中下旬水温下降后死亡率大幅下降。

发病急，死亡率高

发病塘口早期每天死亡十几尾，几天内可增至上百尾，甚至上千尾，死亡率达90%以上。

对外部条件刺激极为敏感

季节交替、气候突变、昼夜温差大、水环境恶化、其他病原感染、用药不当等均可诱发或加剧病情。

可致死及病情反复

可单独感染致死，也可因感染后抵抗力下降伴随着多种寄生虫、细菌感染致死或病情反复。

诊断方法

初步诊断

根据病鱼典型的临床症状作出初步诊断。

样品采集

采集10尾病鱼，取脾和肾（特别是脾）。

实验室诊断

组织学检测：病鱼的脾、心、肾、肝和鳃进行组织切片，显微镜观察典型、异常的巨大细胞，嗜碱性细胞肿大。

病毒检测：可疑样品的组织液接种斜带石斑鱼罐细胞系（GF-1），25℃生化培养中培养，10天内用相差显微镜观察细胞病变（CPE）情况。7天可疑样品还未出现CPE，而对照样品已出现CPE，应立即再次传代细胞。如果仍未出现CPE，视为阴性，排除可疑。当CPE出现后，必须用免疫学方法或PCR方法鉴定病毒，免疫荧光检测为阳性，则可以确诊为本病。用RSIV的上游引物（5·-CGGGGG-CAA-TGA-CGA-CTA-CA-3’）和下游引物（5’-CCG-CCT-GTGCCT-TTT-CTG-GA-3’）进行PCR扩增RSIV的586bp基因片段。对PCR阳性条带进行测序，与RSIV基因序列相同可作出诊断。

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防治措施

进行有效的池塘处理

有条件的塘口可设置独立的进排水系统，避免与其他塘口发生交叉感染。养殖前期对养殖塘口（特别是前一年发病塘口）进行干塘清淤，选择连续睛好天气，使用大量生石灰化水全池泼洒。塘口连续曝晒1周以上，期间需多次翻动塘底淤泥，确保塘底病原能被高pH和紫外线杀灭。

放养健康苗种，合理设置放养密度

尽量从有资质的省、市级苗种场购苗，坚决不从传染性脾肾坏死病发病严重的地区引进苗种。有条件的可购买经过鉴定的无毒苗种，或者将购进的苗种送至当地有资质的检测机构进行PCR检测，确保未携带ISKNV后再下塘。

根据池塘条件及养殖技术水平合理设置放养密度，建议适当降低放养密度，特别是有发病史的塘口。每亩放养3~5厘米苗种1000~1200尾，放养密度过大，水体溶氧消耗较大，鱼的排泄物较多，造成氨氮、亚硝酸盐急剧升高，对养殖水体环境造成较大压力，水质管理困难，疾病风险升高。同时，塘内还可适当套养少量花白鲢、河蟹以减少水体中的残饵及有机质，降低水质恶化的风险。

饵料鱼的管理

饵料鱼的质量好坏直接关系到鱼的抗病能力。饵料鱼池塘要定期使用消毒剂进行消毒处理。饵料鱼饲养过程中，要长期在饲料中添加维生素C和大蒜素以提高饵料鱼的抗病能力。有实验表明，ISKNV具有一定的宿主范围。它不仅能感染蹶鱼，还能感染其他种类的鱼。而鱼类病毒是可以通过食物经口和消化道传播，饵料鱼放养前最好也经过PCR检测，确保未携带ISKNV。另外，饵料鱼在往鱼池塘投喂前需经过严格消毒，建议用4%~5%食盐水浸泡数分钟。

发病高峰前期管理

每年6月下旬至10月上旬为鱼类传染性脾肾坏死病发病高峰期（期间高温阶段有暂停期），为保证有一个健康体质和良好的养殖环境来平稳度过发病高峰期，前期养殖管理尤为重要。加强水质管理，鱼苗种下塘后，每10天用EM菌、光合细菌等有益微生物制剂调节水质，确保水中有益菌占据优势地位。5月初寄生虫发病高峰期使用硫酸铜或苦参碱杀虫1次，每月根据水质情况使用聚维酮碘等消毒杀菌，再使用微生物制剂调节水质。

发病期管理

当发现有可疑症状时要及时送检，确诊为鱼类传染性脾肾坏死病后，应及时捞除病鱼及死鱼，深埋消毒，进行无害化处理。此时塘内的鱼体质较弱，不要添、换水，切忌病急乱投医，盲目用药，防止鱼体产生应激反应，死亡量增大减少甚至停止投喂饵料。使用聚维酮碘等温和的消毒剂对水体消毒1~2次，再使用微生物制剂调节水质，同时增加水体溶氧，确保水体溶氧在5.0毫克/升以上。渔具不要与未发病塘口混用，以防交叉感染。

疫苗研究

鱼类传染性脾肾坏死病疫苗包括细胞灭活疫苗、重组亚单位疫苗和DNA疫苗等。细胞灭活疫苗具有安全性好、免疫原性强、保护率高、研发周期短等优点，成为最常用的疫苗种类。另外ISKNV重组亚单位疫苗和DNA疫苗也取得较好的进展。

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