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免疫共沉淀法

以抗体和抗原之间的专一性作用为基础的用于研究蛋白质相互作用的经典方法

免疫共沉淀法是以抗体和抗原之间的专一性作用为基础的用于研究蛋白质相互作用的经典方法。是确定两种蛋白质在完整细胞内生理性相互作用的有效方法。当细胞在非变性条件下被裂解时，完整细胞内存在的许多蛋白质-蛋白质间的相互作用被保留了下来。当用预先固化在argarose beads上的蛋白质A的抗体免疫沉淀A蛋白，那么与A蛋白在体内结合的蛋白质B也能一起沉淀下来。

基本原理
免疫共沉淀技术（Co-Immunoprecipitation, Co-IP）以抗体和抗原之间的专一性结合作用为基础，用于检测和确定生理条件下蛋白质之间的相互作用。其基本原理是将细胞在非变性条件下裂解，在细胞裂解液中加入特异性的抗体，这样抗体可以和已知的抗原形成抗原–抗体复合物，如果在系统中存在与已知抗原相互作用的蛋白质，该蛋白质也会以复合物的形式沉淀下来，经过洗脱就可以得到与已知抗原相互作用的蛋白质，然后进行SDS-PAGE及Western blotting分析。
该技术研究的相互作用的蛋白质都是经翻译后修饰的处于天然状态的，因此可避免人为的影响，同时可分离得到天然状态的相互作用蛋白复合物。但Co-IP难以检测到弱或瞬时相互作用。此外，多个相互作用蛋白质复合物的存在也可引起Co-IP中的相互作用。
实验步骤
（1）转染后24-48 h 可收获细胞，加入适量细胞裂解缓冲液含蛋白酶抑制剂冰上裂解30min, 细胞裂解液于4°C， 最大转速离心30 min后取上清（2）取少量裂解液以备Western blot分析，剩余裂解液加1μg相应的抗体加入到细胞裂解液，4°C缓慢摇晃孵育过夜（3）取10μlproteinA琼脂糖珠，用适量裂解缓冲液洗3次，每次3,000 rpm离心3min；（4）将预处理过的10μlproteinA琼脂糖珠加入到和抗体孵育过夜的细胞裂解液中4°C缓慢摇晃孵育2-4h，使抗体与proteinA琼脂糖珠偶连；
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