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免疫电泳法

免疫电泳法(immunoelectrophoresis)

免疫电泳法是将抗原样品在琼脂平板上先进行电泳，使其中的各种成分因电泳迁移率的不同而彼此分开，然后加入抗体做双相免疫扩散，把已分离的各抗原成分与抗体在琼脂中扩散而使其相遇，在二者比例适当的地方，形成肉眼可见的沉淀弧。

简介
免疫电泳法是指利用凝胶电泳与双向免疫扩散两种技术结合的实验方法。在电场作用下标本中各组分因电泳迁移率不同而分成区带，然后沿电泳平行方向将凝胶挖一沟槽，将抗体加入沟槽内，使抗原与抗体相互扩散而形成沉淀线。根据沉淀线的数量、位置及形状，以分析标本中所含组分的性质，本实验常用于抗原分析及免疫性疾病的诊断。此法在微量的基础上具有分辨率高，灵敏度高，时间短，是很理想的分离和鉴定蛋白质混合物的方法。用于抗原、抗体定性及纯度的测定。
【材料】
1%离子琼脂（pH8.6巴比妥缓冲液加入等量蒸馏水，再加入1%琼脂，溶解后用脱脂棉过滤，分装试管，实验前加热溶解置56~60℃水浴箱中平衡温度备用）。
免疫电泳用玻片
待检血清
人IgG（1mg/ml）
抗人全血清抗体
微量加样器及塑料吸头
尖吸管及橡皮吸头
打孔器、解剖刀、尺、打孔模板、湿盒等。
电泳仪：将pH8.6巴比妥缓冲液注入电泳槽内（注意正负极各槽内所加入的量应在同一水平），并将滤纸裁成适当长度和宽度以备搭桥使用。
附：pH8.6巴比妥缓冲液配制方法
巴比妥钠（Barbital Sodium）10.3g
巴比妥酸（Barbituric Acid）1.84g
蒸馏水1000ml
1．称量巴比妥酸置一三角烧瓶中加蒸馏水200ml于煮锅内加热溶解。
2．称量巴比妥钠置另一容器中加蒸馏水700ml，摇动溶解。
3．将已融化的巴比妥酸溶液与巴比妥钠溶液混合，用蒸馏水补足1000ml。
4．混匀后，用精密pH试纸测定pH值，备用。
实验方法
1．取已溶化的1%离子琼脂倾注于玻片上制成琼脂板。
2．冷却凝固后，按照模板于挖槽线上下两侧各打孔一个，并分别用微量加样器加入待检血清及人IgG各15μl。
3．置电泳槽内，注意电泳标本应放负极“―”一侧。并将已浸透缓冲液的滤纸一端覆盖于琼脂板两侧各约0.5mm，另一端浸于电泳液中。
4．接通电源。电压、电流及时间应视仪器性能而定。一般电势梯度6V/cm，电流每板20mA，泳动时间1~2小时。
5．电泳完毕，关闭电源，取出琼脂板。按模板位置用解剖刀挖横槽，用特制尖吸管加入抗人全血清抗体。
6．置湿盒中，于37℃温箱中扩散24小时。
结果
根据沉淀弧的位置及形状，参照免疫球蛋白迁移范围示意图，识别主要Ig。
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