厌氧培养

微生物置于与分子态氧隔绝状态下所进行的培养

厌氧培养（anaerobic culture）指把微生物置于与分子态氧隔绝状态下所进行的培养，适用于兼性厌氧菌和专性厌氧菌。

分类

由于目的不同而有不同的培养方法，可分为以下几大类：

（1）与空气隔绝或尽量少接触空气的培养法：在三角瓶瓶颈以下装满液体培养基，通过煮沸把溶解的空气赶出后，立即冷却进行细菌接种。由于发酵而产生H2和CO2时，就可进一步确认是厌氧细菌。另外，把琼脂培养基加入普通试管约10厘米高度进行穿刺培养，或移植于液体培养基和固体斜面培养基上以后，再加一层液体石腊或矿物油，用这些方法可防止与空气接触。

（2）除掉空气的方法：把微生物装入耐压容器中进行真空培养，或充满二氧化碳、氢气、氮气、氩气等。这些气体可把事先混入的微量氧气除掉。在氢存在时，可用置换后飞溅火花等方法来除掉残存的氧气

（3）去氧的方法：使用碱性邻苯三酚（pyrogallol）、黄磷、金属铬和稀硫酸进行化学除氧，或使用好氧细菌及发芽的种子，使通过呼吸而消耗掉氧气。

（4）在培养基中加入还原剂（如0.1%的巯基乙酸钠盐，0.01%的硫化钠等）。以上各种方法进行适当组合就能进一步确认厌氧细菌。为了确定厌氧性，可在碱性条件下加入葡萄糖并加热，与配制的还原型次甲蓝（美蓝）溶液一起加入，保持脱色状态即可。

培养工艺

厌氧培养——微生物厌氧培养

1．可利用厌氧产气袋法进行厌氧培养。

规格2.5L的产气袋只能将2.5L容积内的氧气完全吸收，转化成二氧化碳，同理，3,5L的产气袋能吸收3.5L容积的氧气。微需要产气袋和二氧化碳产气袋亦是如此，为达到相应的氧气浓度和二氧化碳浓度，不仅容积要固定，放置的培养物数量也基本要装满，在出厂前都根据计算设定好了的，所以，培养也需要在设定的条件下进行。

2．厌氧袋（Bio-bag）即在塑料袋内造成厌氧环境来培养厌氧菌。塑料袋透明而不透气，内装气体发生管（有硼氢化钠的碳酸氢钠固体以及5%柠檬酸安瓿）、美兰指示剂管、钯催化剂管、干燥剂。放入已接种好的平板后，尽量挤出袋内空气，然后密封袋口。先折断气体发生管，后折断美兰指示剂管，命名袋内在半小时内造成无气环境。如不突变表示袋内已达厌氧状态，可以孵育。

3．厌氧手套箱（Anaerobie glove box）是迄今为止国际上公认的培养厌氧菌最佳仪器之一。它是一个密闭的大型金属箱，箱的前面有一个有机玻璃做的透明面板，板上装有两个手套，可通过手套在箱内进行操作，故名。箱侧有一交换室，具有内外二门，内门通箱内先关着。欲放物入箱，先打开外门，放入交换室，关上外门进行抽气和换气（H2，CO2，N2）达到厌氧状态，然后手伸入手套把交换室内门打开，将物品移入箱内，关上内门。箱内保持厌氧状态，也是利用充气中的氢在钯的催化下和箱中钱残余氧化合成水的原理。该箱可调节温度，本身是孵箱或孵箱即附在其内，还可放入解剖显微镜便于观察厌氧菌菌落，这种厌氧箱适于作厌氧细菌的大量培养研究，大量培养基可放入作预还原和厌氧性无菌试验。金属硬壁型厌氧箱的抽气、充气、厌氧环境和温度等均系自动调节。

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