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斐林试剂

鉴定可溶性的还原性糖的试剂

斐林试剂(Fehling's solution)是一种可以鉴别还原性物质的试剂，一般由氢氧化钠与硫酸铜溶液配成，由德国化学家赫尔曼·冯·斐林在1849年发明的。斐林试剂常用于鉴定可溶性的还原性糖的存在，可与还原性糖反应生成砖红色沉淀。

定义
1849年，德国化学家斐林（Hermann vonFehling，1812年-1885年）发明了斐林试剂。它是由氢氧化钠的含量为0.1 g/mL的溶液和硫酸铜的含量为0.05 g/mL的溶液，还有含量为0.2g/mL酒石酸钾钠配制而成的，其本质是铜离子和酒石酸形成的配合物——酒石酸合铜（高中认为是新制的氢氧化铜）。
斐林试剂是二价铜离子的酒石酸钾钠配合物，可以被脂肪醛或还原性糖还原为氧化亚铜。斐林试剂为深蓝色溶液， 在与脂肪醛或还原性糖共热时， 蓝色消失，析出红色的氧化亚铜沉淀。在氧化亚铜析出过程中， 反应液的颜色可能经过由蓝色→绿色→黄色→红色沉淀的逐渐变化，反应较快时，直接观察到红色沉淀。
它与可溶性的还原性糖（葡萄糖、果糖和麦芽糖）在加热的条件下，能够生成砖红色的氧化亚铜沉淀。因此，斐林试剂常用于鉴定可溶性的还原性糖的存在与否。
配制方法
配制方法：0.1 g/mL NaOH（甲液）和0.05 g/mL CuSO4（乙液）。甲液配制方法是将50g氢氧化钠和137g酒石酸钾钠溶于500 mL蒸馏水中（贮于带橡皮塞的瓶中）。乙液配制方法是将34.5g结晶硫酸铜溶于500mL水中，加0.5 mL硫酸。混合均匀。
斐林试剂的使用方法：一般将斐林试剂甲液和乙液等体积混合（或在2 mL甲液中滴4～5滴乙液），再将混合后的斐林试剂倒入待测液，水浴加热或直接加热（高中人教版生物必修一中为60℃水浴加热）。如待测液中存在还原糖，则呈现砖红色沉淀；如待测液中不存在还原糖，则仍然呈蓝色。
还原糖实验
1、向试管内注入2mL待测组织样液。
2、向试管内注入1mL斐林试剂（甲乙液混合均匀，甲液量较多，乙液只需少量。然后再注入）。【人教版高一生物必修一第十八页说的是“甲乙液等量混合均匀后再注入】
3、将试管放入盛有50~65℃温水的大烧杯中加热约2min。
4、观察试管中出现的颜色变化（应为浅蓝色——棕色——砖红色沉淀）。
对比
班氏试剂
斐林试剂和班氏试剂的使用方法及原理不尽相同。斐林试剂和班氏试剂都是检验还原性糖的试剂，二者的使用方法及原理、成分也有区别，下面就从这几种试剂的使用原理、成分及使用方法等方面做一简单总结。
（1）班氏试剂常用于尿糖的鉴定，其配方与斐林试剂不一样，其配方为：
①400mL水中加85g柠檬酸钠和50g无水碳酸钠；
②50mL加热的水中加入8.5g无水硫酸铜。制成溶液；
③把CuSO4溶液倒入柠檬酸钠溶液中，边加边搅，如产生沉淀可滤去。
（2）其反应原理与斐林试剂略有差别。利用斐林试剂鉴定时，斐林试剂甲和斐林试剂乙直接反应生成酒石酸络铜离子。
酒石酸络铜离子和可溶性还原糖在加热条件下反应产生砖红色沉淀。而班氏试剂中的产生却是这样的：柠檬酸钠作为络合剂，由碳酸钠提供碱性。CuSO4与柠檬酸钠溶液和Na2CO3溶液混合时生成柠檬酸络铜离子，柠檬酸络铜离子与葡萄糖中的醛基反应生成砖红色沉淀。
（3）两种试剂的保存方式不同。斐林试剂甲和斐林试剂乙混合后会因酒石酸有一定的还原性而自发地缓慢产生氧化亚铜沉淀，因此斐林试剂一般为现用现配；而班氏试剂的配方中，柠檬酸钠比较稳定，实际碱性也不强，不易还原铜离子产生氧化亚铜沉淀，因此该试剂可长期保存。
当然，无论用班氏试剂还是斐林试剂，归根结底都是二价铜与醛基在沸水浴加热条件下反应而生成砖红色的沉淀，两者反应现象一样，这就是二者的相同之处。
双缩脲试剂
斐林试剂和双缩脲试剂
斐林试剂和双缩脲试剂都由NaOH溶液（斐林试剂中还有酒石酸钾钠）和CuSO4溶液组成，但二者有如下三点不同：
（1）溶液浓度不同
CuSO4溶液称为斐林试剂乙，其浓度为0.05 g/mL；
CuSO4溶液称为双缩脲试剂B，其浓度为0.01 g/mL。
（2）使用原理不同
斐林试剂是新配制的溶液，它在加热条件下与醛基反应，被还原成砖红色的沉淀，可用于鉴定可溶性还原糖的存在。用斐林试剂鉴定可溶性还原糖时，溶液的颜色变化过程为：浅蓝色→棕色→砖红色（沉淀）。
鉴定生物组织中是否含有蛋白质时，常用双缩脲法，使用的是双缩脲试剂，发生的是双缩脲反应。具有两个或两个以上肽键的化合物皆可与双缩脲试剂产生紫色反应。蛋白质的肽键在碱性溶液中能与Cu2+络合成紫红色的化合物。颜色深浅与蛋白质浓度成正比。
（3）使用方法不同
斐林试剂使用时，先等体积混合甲、乙两液，而后立即使用，反应需要加热（有时不加热也反应）；双缩脲试剂使用时，先加入NaOH溶液（1mL），振荡摇匀，造成碱性的反应环境，然后再加入3~4滴CuSO4溶液，振荡摇匀后观察现象。
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