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组蛋白修饰检测

通过各种方法对组蛋白磷酸化、乙酰化、甲基化、泛素化等共价修饰水平进行的分析

组蛋白修饰检测是指通过各种方法对组蛋白磷酸化、乙酰化、甲基化、泛素化等共价修饰水平进行分析。组蛋白共价修饰在真核细胞的染色质结构重塑和基因表达调控方面发挥着重要的作用，通过细胞组蛋白修饰检测可区分出具有特殊组蛋白表型和临床预后的癌症患者亚群，可以作为癌症患者预后及临床治疗反应的预测指标，有助于指导癌症患者辅助化疗方案的选择等。

检查前准备
向被检测者解释本操作的目的、方法等，消除顾虑；选取血液、其他体液或细胞进行检测，如需要进行有创伤的操作则需要提前完善凝血功能测定等相关检查。
操作方法
1.染色质免疫沉淀
染色质免疫沉淀是用于分析基因组特定区域染色质中组蛋白修饰状态的实验方法。首先用1%甲醛等能穿透细胞的可逆的化学交联试剂将核小体中的组蛋白与DNA轻微交联，分离染色质，用超声处理仪切割DNA到平均3个核小体长度，用抗乙酰化或甲基化组蛋白的特异性抗体进行免疫沉淀，提取逆转交联后沉淀下来的DNA，PCR扩增特定的DNA片段，从而检测特定基因相关染色质中组蛋白的修饰情况。
2.蛋白芯片技术
通常选用以特异性抗体为探针的抗体芯片和液相芯片，分别将特异性抗体探针固定到固相支持物或液相体系中的小球体基质上，分别与样品杂交，通过特定的仪器检测，可以对同一个样品中的多个不同的分子同时进行检测。其在蛋白学研究中具有微型化、集成化、高通量化等优点。
3.Western印迹
直接用乙酰化或甲基化组蛋白的特异性抗体检测细胞或组织核蛋白中相应组蛋白的表达情况。
4.组蛋白乙酰化酶和去乙酰化酶活性的检测
首先提取含有待检测酶的核蛋白或纯化的乙酰化酶和去乙酰化酶，与标记的底物分子反应，通过检测转化的标记底物来判断酶活性。
临床意义
组蛋白的修饰可以改变DNA-组蛋白的相互作用，使染色质的构型发生改变。组蛋白乙酰化修饰大多发生在H3、H4的赖氨酸残基上，与活化的染色质构型相关联；组蛋白甲基化修饰多发生在H3、H4的赖氨酸和天冬氨酸残基上，与基因抑制及基因的激活相关，取决于被修饰的位置和程度；组蛋白磷酸化修饰多发生与丝氨酸残基，一般与基因活化相关；组蛋白泛素化修饰则是碳端的赖氨酸修饰，启动基因表达。
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