细菌菌落总数

牛肉膏蛋白胨琼脂培养基中腐生性细菌菌落总数

细菌菌落总数（CFU）是指1 mL水样在牛肉膏蛋白胨琼脂培养基中，于37 ℃培养24 h后所生长的腐生性细菌菌落总数。它是有机物污染程度的指标，也是卫生指标。在饮用水中所测得的细菌菌落总数除说明水被生活废物污染的程度外，还指示该饮用水能否饮用。但水源水中的细菌菌落总数不能说明污染的来源。因此，结合大肠菌群数以判断水的污染源的安全程度就更全面。

介绍

菌落是指细菌在固体培养基上生长繁殖而形成的能被肉眼识别的生长物，它是由数以万计相同的细菌集合而成。当样品被稀释到一定程度，与培养基混合，在一定培养条件下，每个能够生长繁殖的细菌细胞都可以在平板上形成一个可见的菌落。

菌落总数测定是用来判定食品被细菌污染的程度及卫生质量，它反映食品在生产过程中是否符合卫生要求，以便对被检样品做出适当的卫生学评价。菌落总数的多少在一定程度上标志着食品卫生质量的优劣。

我国现行《生活饮用水卫生标准》（GB5749--2006）规定：细菌菌落总数在1 mL自来水中不得超过100个。细菌种类很多，有各自的生理特性，必须用适合它们生长的培养基才能将它们培养出来。然而，在实际工作中却不易做到，所以通常用一种适合大多数细菌生长的培养基培养腐生性细菌，以它的菌落总数表明有机物污染程度。水中细菌总数与水体受有机污染的程度成正相关。因此细菌总数常作为评价水体污染程度的一个重要指标。细菌总数越大，说明水体被污染得越严重。

仪器和材料

（1）锥形瓶（500 mL）、试管（18 mm×180 mm）、移液管1 mL 2支及10 mL 1支、培养皿（直径90 mm）、接种环、试管架、酒精灯

（2）自来水（或受粪便污染的河、湖水）400 mL

（3）无菌水、蛋白胨、牛肉膏、氯化钠、琼脂

（4） 1 mol/L NaOH、1 mol/L HCI、精密pH试纸6.4～8.4

水样采集保存

采集水样的器具必须事前灭菌。

(1) 自来水水样的采集先冲洗水龙头，用酒精灯灼烧水龙头，放水5～10 min，在酒精灯旁打开水样瓶盖（或棉花塞），取所需的水量后盖上瓶盖（或棉塞），迅速送回实验室。经氯处理的水中含余氯，会减少水中细菌的数目，采样瓶在灭菌前加入硫代硫酸钠，以便取样时消除氯的作用。硫代硫酸钠的用量视采样瓶的大小而定。若是500 mL的采样瓶，加入1.5%的硫代硫酸钠溶液1.5 mL（可消除余氯量为2 mg/L的450 mL水样中全部氯量）。

（2）河湖、井水、海水的采集要用特制的采样器，采样器是一金属框，内装玻璃瓶，其底部装有重沉坠，可按需要坠入一定深度。瓶盖上系有绳索，拉起绳索，即可打开瓶盖，松开绳索瓶盖即自行塞好瓶口。水样采集后，将水样瓶取出，若是测定好氧微生物，应立即改换无菌棉花塞。

（3）水样的处置水样采取后，迅速送回实验室立即检验，若来不及检验放在4℃冰箱内保存。若缺乏低温保存条件，应在报告中注明水样采集与检验相隔的时间。较清洁的水可在12 h以内检验，污水要在6 h内结束检验。

实验内容

自来水

以无菌操作方法，用无菌移液管吸取1 mL充分混匀的水样注入无菌培养皿中，倾注入已融化并冷却至50 ℃左右的营养琼脂培养基，平放于桌上迅速旋摇培养皿，使水样与培养基充分混匀，冷凝后成平板。每个水样倒三个平板。另取一个无菌培养皿倒入培养基冷凝成平板作空白对照。将以上所有平板倒置于37 ℃恒温箱内培养24 h，计菌落数。算出三个平板上长的菌落总数的平均值即为1 mL水样中的细菌总数。

地表水

① 稀释水样在无菌操作条件下，以10倍稀释法稀释水样，视水体污染程度定稀释倍数。取在平板上能长出30～300个菌落的该种水样的稀释倍数。

② 接种用无菌移液管吸取三个适宜浓度的稀释液1 mL（或0.5 mL）加入无菌培养皿内，再倒培养基，冷凝后倒置37 ℃恒温箱中培养。

③ 计菌落数将培养24 h的平板取出计菌落数。

菌落计数

用肉眼观察，计平板上的细菌菌落数，也可用放大镜和菌落计数器计数。记下同一浓度的三个平板的菌落总数，计算平均值，再乘以稀释倍数即1 mL水样中的细菌菌落总数。各种不同情况的计算方法如下：

① 首先选择平均菌落数在30～300进行计算，当只有一个稀释度的平均菌落符合此范围时，则以该平均菌落数乘以稀释倍数报告之。

② 若有两个稀释度的平均菌落数均在30～300，则按两者之菌落总数之比值来决定，若其比值小于2应报告两者之平均数，若大于2则报告其中较小的菌落总数。

③ 若所有稀释度的平均菌落数均大于300，则应按稀释度最高的平均菌落数乘以稀释倍数报告之。

④ 若所有稀释度的平均菌落数均小于30，则应按稀释度最低的平均菌落数乘以稀释倍数报告之。

⑤ 若所有稀释度的平均菌落数均不在30～300，则以最接近300或30的平均菌落数乘以稀释倍数报告之。

⑥ 在求同一稀释度的平均数时，若其中一个平板上有较大片状菌落生长时，则不宜采用，而应以无片状菌落生长的平板作为该稀释度的平均菌落数。若片状菌落约为平板的一半，而另一半平板上菌落数分布很均匀，则可按半平板上的菌落计数，然后乘以2作为整个平板的菌落数。