葡萄糖检测试剂盒

葡萄糖检测试剂盒

葡萄糖检测试剂盒为医用体外诊断试剂,做辅助诊断用,用于人血清、血浆、尿液或脑脊液中葡萄糖浓度的体外定量分析。

分类
按检测原理不同分为以下三类:
1. 葡萄糖检测试剂盒[己糖激酶法(HK法)]
2. 葡萄糖检测试剂盒[葡萄糖氧化酶法(GOD-PAP法)]
3. 葡萄糖检测试剂盒[电极法]
原理
1. 己糖激酶法(HK法)
葡萄糖 + ATP G-6-P+ ADP
G-6-P + NAD+ 6-磷酸葡萄糖+NADH + H
NADH在340/380nm的吸光度变化与标本中存在的葡萄糖数量成正比,可在340/380nm波长处进行吸光度测定,同时与标准品吸光度比较,从而计算出样本中葡萄糖的浓度。
2. 葡萄糖氧化酶法(GOD-PAP法)
葡萄糖+O2+H2O 葡萄糖酸+H2O2
H2O2+苯酚+4-氨基安替比林 醌亚胺色素+H2O
上述反应生成的红色醌亚胺色素与样本中葡萄糖的浓度成正比,可在500nm(490至520nm)波长处进行吸光度测定,同时与标准品吸光度比较,从而计算出样本中葡萄糖的浓度。
计算公式
葡萄糖浓度(mM)=(测定管吸光度-空白管吸光度)/(标准管吸光度-空白管吸光度)×标准浓度
3. 电极法
葡萄糖氧电极置于含有适量葡萄糖氧化酶的溶液中,当加入样品后,样品中的葡萄糖被氧化而消耗氧。由于氧消耗量与血糖浓度呈正比,而电极的极限扩散电流又与溶液中的氧含量呈正比,因此,氧电极值即可反映样品中血糖浓度。
使用方法
1. 葡萄糖氧化酶法(GOD-PAP法)
取3支试管,编号,按下表操作(可根据使用检测仪器调整样品与工作液体的使用量):
混匀,置37℃水浴中保温15 min,在波长500 nm处比色,以空白管调零,读取标准管及测定管吸光度。
2. 葡萄糖氧化酶法(GOD-PAP法)
取3支试管,编号,按下表操作(可根据使用检测仪器调整样品与工作液体的使用量):
混匀,置37℃水浴中保温15 min,在波长340 nm处比色,以空白管调零,读取标准管及测定管吸光度。
3. 电极法
首先将氧电极置于含有适量葡萄糖氧化酶的溶液中,然后加入待测样品,样品中的葡萄糖被氧化而消耗氧。由于氧消耗量与血糖浓度呈正比,而电极的极限扩散电流又与溶液中的氧含量呈正比,因此,氧电极值即可反映样品中血糖浓度。
葡萄糖检测的意义
血液中葡萄糖,主要来自食物。它是糖在体内的运输形式,通过糖元生成与糖元分解、糖元异生与糖元酵解、脂肪形成与解脂作用间的相互调节和平衡,血糖的相对恒定对维持机体正常生理功能有重要意义。
葡萄糖升高:高血糖症最常见的是糖尿病。胰腺炎、胰腺癌等弥漫性胰腺疾患,空腹血糖可增高,除严重病例外,一般不超过8.3mM。抽搐及某些疾病终期,糖元分解加速可出现轻度高血糖;窒息可引起酸中毒及糖原分解增多,结果出现高血糖。感染性疾病、毒血症以及颅内疾患,由于机体内对病理损伤的反应,可能出现明显的高血糖。麻醉往往可出现高血糖,血糖升高的程度与麻醉种类和时间长短有关,并出现尿糖。
葡萄糖降低:血糖值低于2.8mM,可诊断为低血糖。最多见于接受超剂量胰岛素治疗的糖尿病患者。胰岛β-细胞瘤患者可出现严重的低血糖,有时降至零,这种情况常见于清晨或肌饿禁食时出现。甲状腺功能低下、脑垂体功能低下和肾上腺皮质功能低下患者,血糖可降至正常范围以下。由于肝糖原分解过程中某些酶的缺陷而引起的肝糖元累积病,糖元不能转化为葡萄糖,也可能出现低血糖。慢性腹泻吸收不良及脂肪泻,由于葡萄糖吸收障碍可使血糖降低;有些胃次全切除术后的患者可出现餐后一时性低血糖,或称反应性低血糖。另外,剧烈运动可产生低血糖。肝脏病由于肝糖元贮备不足,有时可出现低血糖。
样本采集与处理
1. 静脉采血:除非是卧床的病人,一般在采血时取坐位。
2. 标本类型:无溶血的血清或肝素化的血浆。
3. 标本稳定性:样本须在30分钟内分离血清或血浆,2~8℃下冷藏的血清或血浆可稳定24小时,-20℃冰冻起来可稳定1个月。
4. 样本处理:血标本应尽快送检验室。室温下放置10-15min后离心分离血清或血浆置样品杯中待测。
试剂的储存
1. 未开封的试剂于2-8℃保存,稳定至有效期。
2. 已开封的试剂在阴暗处(2-8℃)可稳定一个月。
3. 避光保存,用后立即盖好封盖。
4. 发现试剂中有沉淀物禁止使用。
注意事项
1. 葡萄糖氧化酶法可直接测定脑脊液葡萄糖含量,但不能直接测定尿液葡萄糖含量。因为尿液中尿酸等干扰物质浓度过高,可干扰过氧化物酶反应,造成结果假性偏低。
2. 对于血液样品需及时分离血细胞,因为红细胞的酵解会导致测定结果偏低。建议测定样品以草酸钾-氯化钠为抗凝剂抑制糖酵解。
3. 严重黄疸,溶血及乳糜样血清应先制备无蛋白血滤液,再进行测定。
参考文献
[1] 尚红著.全国临床检验操作规程[M].北京:人民卫生出版社,2015,359-364.
[2] 费维伦,梁春阳.3种血清葡萄糖测定方法的比较[J].检验医学与床,2012,9(20):2573-2574.
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