红2G

合成染色料

红2G（又称为CI食品红10，国际编码系统编号128）是一种合成染色料。商业上应用的是它的钠盐（水溶性）或其铝色淀（非水溶性）。红2G呈浅红色，能令食物添上桃红至血红色，对热、光、酸和二氧化硫的稳定性极高。在香港，自二零零八年十二月一日起，红2G不得于食物内使用。

染色料应用

主要用于羊毛织物的染色。拼混性强，适宜于染浅，中色，可以直接在毛织物；锦纶和蚕丝织物上印花。还可以用来制造色淀以及化妆品、纸张、肥皂、和木材等的着色制造墨水用。其钡盐可作用有机颜料，还用于塑料和医药。

“红色2G”在可以使用的国家2007年之前被允许在谷类最低含量为6%的早餐肠中使用，以及在蔬菜或谷类最低含量为4%的汉堡中使用，目的是使肉食略带红色，以免加热后变成褐色。

毒性实验

对细胞形态的影响实验

将 HL-7702 人正常肝细胞培养于细胞培养液中，对照组不加任何色素，试验组加入浓度为：红 2G 为 0.02，0.1，0.5，2.5 g/L；之后用倒置显微镜观察培养瓶内细胞形态变化

处理组细胞形态均有变化非常明显，有些细胞形态逐渐变得模糊不清，呈不规则形态，细胞间隙增大；有少量细胞脱落，还有些细胞坏死，变圆漂浮，饱核固缩，胞内形成许多空泡，细胞形态影响实验的结果表明红2G对细胞有一定的抑制作用。

MTT比色法

是一种检测细胞存活和生长的方法。其检测原理为活细胞线粒体中的琥珀酸脱氢酶能使外源性MTT还原为水不溶性的蓝紫色结晶甲瓒（Formazan）并沉积在细胞中，而死细胞无此功能。二甲基亚砜（DMSO）能溶解细胞中的甲瓒，用酶联免疫检测仪在490nm波长处测定其光吸收值，可间接反映活细胞数量。在一定细胞数范围内，MTT结晶形成的量与细胞数成正比。

该方法取至少传代一次以上的对数生长期的 HL-7702 细胞悬液，用 0.25%胰蛋白酶约 0.5 mL 消化处理后，按 1×104/孔的密度接种于 96 孔细胞培养板中，适应性培养后，随机分为阴性对照组、不同色素处理组；空白对照组加等量的 PBS溶液，处理组等比设置 6 个剂量，每组设 4 个平行孔，加药后置细胞于培养箱中培养 24 h。在实验结束前 4 h（37℃，5% CO2），每孔加入 5 mg/mL MTT 溶液10 μL，37℃孵育 4 h 后，向每孔加入 SDS-HCl 100 μL 以溶解沉淀物。选择 570nm 在 ELx800 型酶标仪上测定光密度值（OD 值），计算细胞相对存活率，RGR=(试验组 OD 值/对照组 OD 值)×100%。以及 IC50=lg-1[Xm-i(∑p-0.5)]，

其中 Xm 为设计的最大浓度的对数值，i 为各浓度倍比浓度的对数值，∑p 为各组生长抑制率之和。

2.选红 2G分别与酸性绿 S、碱性嫩黄 O 和碱性橙色素进行混合。实验设置 1 个空白组和阴性对照组，处理组按 A 在 AB 混合中的比例为 0、25%、50%、75%和 100%设置 5 个剂量组，以及各自单独作用 50%A、50%B 两组，4 个平行。A,B 分别为两种物质的 IC25-30。通过 50%A:50%B 混合后的“实测抑制率值”同 50%A、50%B 各自单独作用值和（即“真实期望值”）进行 t 检验判定其联合作用，p＜0.05 认为是差异有统计学意义。

红 2G 在使用浓度为 0.5 g/L 时，抑制率已大于 50%，说明红 2G 对 HL-7702 的毒性较大

安全评价

2007年欧盟食品安全局对红2G及其他食品着色剂的安全性进行了评估，其中一些还是30年前批准使用的。在发表的声明中，该机构称，专家小组在对1999年以来多项针对“红2G”的试验评估后发现，这种编号E128的着色剂能在肠内转变成苯胺，根据动物实验，苯胺是一种致癌物质。“由于现在无法断定摄入多少苯胺对人体是安全的，专家小组决定对‘红色2G’发出安全警告。”并随后撤销了日容许摄入量，禁止在食品中使用，中国、美国、加拿大、日本、澳大利亚等多国都明确禁止食品中使用红2G。

检测方法

虽然红2G不在我们允许使用的合成色素范围内，但是在中国海关及市场上发现某些食品中存在违规使用红2G的迹象，因而有必要建立准确、有效的方法，便于监测。由于红2G在中国还属于不被允许的合成色素，所以针对红2G中国还没有标准检测方法，经过查阅相关文献，发现可以检测红2G的检测方法有高效液相色谱法和液相色谱-串联质谱法。

反相高效液相色谱法

反相高效液相色谱法简便快速，除能检测红2G外，还能同时对柠檬黄、苋菜红、靛蓝、胭脂红、日落红、亮黑、红2G、诱惑红、酸性绿 S、亮蓝、偶氮玉红、酸性橙 I、碱性嫩黄O、专利蓝 V、碱性橙、酸性橙Ⅱ、赤藓红、酸性黄36、酸性红26、酸性红52 和罗丹明B等共计21种合成色素进行检测。

原理及特点：选用颗粒很细的高效固定相，采用高压泵输送流动相，分离、定性及定量全部分析过程都通过仪器来完成。除了有快速、高效的特点外，它能分离沸点高、分子量大、热稳定性差的试样。

条件：色谱柱为C18柱(4.6 mm × 250 mm )，配有二极管阵列检测器，以乙腈0.05 mol/L乙酸铵梯度洗脱，流速为 1.0 mL/min，柱温为 35℃,检测波长选择 240，410，510，627 nm，进样量为 5 μL。

结果：在 2~40 μg/mL 之间，线性关系良好，回收率在 75%以上。最低检出限为 2~10 μg/mL。

液相色谱-串联质谱法

原理：高效液相色谱一串联质谱法，通过特征的母离子及其子离子信息，对目标物进行定性和定量分析具有高选择性高灵敏度的优势。

样品处理：汽水饮料及配置酒类取20g，加热驱除二氧化碳或乙醇，固体样品粉碎后取样品10g加30mL水温热溶解；试样用柠檬酸溶液调pH值到6左右，将lg聚酞胺粉加入少许水调成粥状放在60℃水浴中，加入到样品中搅拌均匀，以G3漏斗抽滤，加入pH4的水洗三次，然后用甲醇甲酸(3:2)洗涤三到五次再用水洗至中性。用30mL乙醇一氨水一水(7:2:l)解析收集解析液加8mL乙酸中和，蒸发至干。用20%乙睛水定容至smL，经0.22um滤膜过滤待测。

色谱条件

色谱柱:XDB一C18柱(46um,48x100mm)

柱温:30℃；流动相为乙睛(A)和0.02mol/L乙酸铵(B),梯度洗脱

程序:0一0.smin,20%Asmin60%A;8.lmin20%A;13min.20%A；流速0.5ml/min，进样量5ul。

质谱条件

离子源：电喷雾离子源(ESI)；

扫描方式：负离子模式；

检测方式：多重反应检测(MRM)

干燥气温度：350℃；

干燥气流速：12Umin；

喷雾器：40Psi

毛细管电压：4kV；

碰撞气体为氢气[3]

结果

红2G的质量浓度在5-1000ng/mL范围内具有较好的线性关系。根据信噪比S/N=3估算仪器检出限，再根据样品前处理稀释倍数计算出方法检出限（LOD），检出限在1-10ug/L之间。

禁用情况

据食品商务网2007年7月23日报道，欧盟委员会7月20日宣布，将在欧盟范围内禁止使用食品色素“红2G”，红2G主要用于英国和爱尔兰市场上销售的早餐香肠和汉堡包中。根据欧盟现行规定，每公斤食品中“红2G”添加量不得超过20毫克。但由于这种色素被人体摄入后可能会分解出致癌物质苯胺，而存在诱发癌症的“很大可能性”。

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