霍乱弧菌检测

医学术语

霍乱弧菌检查常规方法是：直接涂片、染色检查、动力观察制动试验。

正常值

未检出霍乱弧菌。

临床意义

异常结果：阳性结果的临床分析：显微镜检查可作为快速诊断的参考。革兰染色镜检可见典型革兰阴性弧菌。悬滴暗视野检查可见穿梭样活泼运动。免疫制动试验阳性，具有重要参考意义。上述结果只能做出初步诊断，最后的确诊仍需以培养结果为准。　阳性：见于霍乱。

需要检测的人群：频繁急剧腹泻、呕吐等怀疑为霍乱的病人。

注意事项

检查时：

(1)、采集时请避免挖取沾到马桶内尿液及自来水的部分;同时也请勿将粪便直接置于卫生纸或擦手纸上。

(2)、为避免干扰检验结果，请勿使用棉花棒挖取。

(3)、粪便采集量请勿过少，以避免无足够的检体以供检验。

(4)、若需要以化学法检测粪便潜血时，请于采集前三天避免进食红肉、肝脏及菠菜、甘蓝、花椰菜等食物，以避免造成伪阳性结果。

(5)、若是以免疫法检测粪便潜血时，您不需要限制饮食种类。

(6)、因为婴幼儿不容易一次取到足量的检体，若需要分次收集时，请将检体暂时置于冰箱冷藏保存，以避免细菌滋生。

不适宜人群：　没有霍乱症状的人。

检查过程

一.采样

1. 腹泻患者样本采集：

①水样便采1~3ml，成形便取指甲大小量；

②肛拭子：生理盐水浸湿采便管由肛门插入直肠内3~5cm处旋转取出；

③呕吐物采1~3ml。

2. 水样及液体标本采相对静止表层水（30cm内）500ml，其他液体标本采集500ml，2 ~3小时内送检。

3.10-15只苍蝇作为一份标本。

4. 涂抹样本采集

①2~3支无菌棉签涂抹3~5只以上水生动物表面、腮部及泄殖腔。

②2~3支无菌棉签涂抹食品或物品表面（地沟口，下水管口，水池壁涂抹，餐盘内外侧），直接放入10ml碱胨水送检。

二、动力及动力抑制试验。

三、碱性蛋白胨水（APW）增菌

①粪便、呕吐物、肛拭子与APW比例1：5，碱胨增菌同时接种庆大培养基;必要时可二次增菌;取菌膜下表层培养物0. 1～0. 2 mL转种于10mL碱性胨水管中作二次增菌;第一次增菌37℃培养6h~8h，第二次增菌37℃培养6h~8h.

②各种涂抹标本

碱胨增菌同时接种庆大培养基;必要时可二次增菌;取菌膜下表层培养物0. 1～0. 2 mL转种于10mL碱性胨水管中作二次增菌;一次增菌37℃6-8h，二次增菌37℃6-8h.

③水样和其他液体标本

十倍浓缩碱胨增菌法:取450mL（调pH8.8-9.0）+ 50mL 10×APW;37℃培养（6 -8h）；必要时可二次增菌。

④苍蝇标本

研磨后全部于10mL碱性胨水管中充分混匀37℃培养（6 -8h）。

四、取增菌液表面下的液体，划线接种庆大平板37℃温箱培养18-24h。

五、血清学检查

①增菌接种庆大平板培养24小时后玻片凝集。

②凝集现象10-15秒可出现凝集，一分钟内不出现凝集者，为阴性。做9-10个单菌落。注意弱凝集现象；小川稻叶均凝集时做试管凝集。

③如果凝集颗粒不好，取盐水加菌两个互相对照一起看。

六、分纯：用接种环取抗原抗体复合物接种于普通营养琼脂板上分纯，37℃过夜培养

七、氧化酶试验和菌种保存

①取营养琼脂上菌落涂抹于有试剂的滤纸上,在30秒-1分钟内出现紫蓝色均为阳性；不变色或出现浅粉红后很快褪色，均为阴性。

②用接种针取单个菌落穿刺半固体培养基。