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免疫沉淀法

研究蛋白质间交互作用的生物技术

免疫沉淀法(Immunoprecipitation, IP)是一种研究蛋白质间交互作用的生物技术，这种技术是将蛋白质视为抗原，并利用抗体与之进行特异性结合的特性，来进行研究。这项技术可用来将含有上千种不同蛋白质的样品中，分离和浓缩出特定蛋白质。进行免疫沉淀法时，抗体需要和一个受质结合。

类型
个别免疫沉淀法(IP)：用来分离某个细胞萃取物中的已知特定蛋白质
免疫共沉淀法(Co-IP)：研究整个蛋白质复合体
染色质免疫沉淀法(ChIP)：用来研究DNA上的特定蛋白质
RNA免疫沉淀法(RIP)：和ChIP相近，但RNA免疫沉淀法是用来研究会与RNA结合的蛋白质
RIP技术（RNA Binding Protein Immunoprecipitation，RNA结合蛋白免疫沉淀），是研究细胞内RNA与蛋白结合情况的技术，是了解转录后调控网络动态过程的有力工具，能帮助我们发现miRNA的调节靶点。RIP这种新兴的技术运用针对目标蛋白的抗体把相应的RNA-蛋白复合物沉淀下来，然后经过分离纯化就可以对结合在复合物上的RNA进行分析。RIP可以看成是普遍使用的染色质免疫沉淀ChIP技术的类似应用，但由于研究对象是RNA-蛋白复合物而不是DNA-蛋白复合物，RIP实验的优化条件与ChIP实验不太相同（如复合物不需要固定，RIP反应体系中的试剂和抗体绝对不能含有RNA酶，抗体需经RIP实验验证等等）。RIP技术下游结合microarray技术被称为RIP-Chip，帮助我们更高通量地了解癌症以及其它疾病整体水平的RNA变化。
Millipore基于磁珠的RIP实验流程
基本原理
RIP 实验基本原理：
1. 用抗体或表位标记物捕获细胞核内或细胞质中内源性的RNA结合蛋白。
2. 防止非特异性的RNA的结合。
3. 免疫沉淀把RNA结合蛋白及其结合的RNA一起分离出来。
4.结合的RNA序列通过microarray（RIP-Chip），定量RT-PCR或高通量测序（RIP-Seq）方法来鉴定。
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