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牛血清清蛋白

医学科术语

通过改变离子强度、阿霉素（ADR）的浓度和酸度，用牛血清白蛋白（BSA）研究了泡沫提取ADR的条件。

参数
采用荧光法测定ADR，考察了操作液成分和pH值对测定的影响。实验结果表明：BSA浓度200mg/L，ADR浓度2．0u/mL，pH2．40，NaCl浓度0．5mol/L，气体流速15mL/min，进料体积8．0mL时，阿霉素的二次提取率可达70．3%。并且对其作用机理进行了讨论，ADR实现泡沫提取的主要动力是ADR的疏水部分与BSA分子间发生的疏水作用力。
方法
利用CTAB/正辛醇：
三氯甲烷(4：1V/V)反胶团体系对牛血清白蛋白(BSA)进行相转移中，通过对萃取体系水相的pH值、离子强度、两液相的体积比、小分子糖(葡萄糖、蔗糖)及助表面活性剂(直链醇分子)等因素的改变，探讨了BSA在阳离子表面活性剂体系的萃取机理；
研究结果表明选择合适的条件提取BSA时，萃取率可达到97%，反萃率达到了85%；找到实现牛血清白蛋白分离提纯的有效方法。
1、标准曲线测定法
分别取六只试管，其中一只加入1.0ml蒸馏水做空白，5只分别加入不同体积的浓度为100ug/ml牛血清清蛋白标准液，补充水到1.0ml。然后每只试管加入5.0ml考马斯亮蓝G-250试剂，摇匀放置5min，在紫外-可见分光光度计595nm处测定吸光值。以A595吸光值为纵坐标，牛血清清蛋白的ug数量为横坐标绘制标准曲线。具体操作见下表。
蛋白质标准曲线测定加样
试剂空白12345
100ug/ml牛血清清蛋白/ml1.00.10.20.40.60.8
牛血清清蛋白/ug01020406080
去离子水/ml00.90.80.60.40.2
考马斯亮蓝G-250试剂/ml5.05.05.05.05.05.0
吸光值A595
2、蛋白样品
配制浓度约100ug/ml的待测蛋白质溶液。取一只试管加入1.0ml蒸馏水做空白，一支加入0.5ml待测蛋白质溶液，补充水到1.0ml。然后每支试管加入5.0ml考马斯亮蓝G-250试剂，摇匀放置5min后，在紫外-可见分光光度计595nm处测定吸光值。用测得的吸光值从标准曲线上查得相当于牛血清清蛋白的ug数量，计算出待测蛋白质的含量。
在标准蛋白质和蛋白质样品的测定时，为了减小误差，每一个浓度的蛋白质做3支平行管。
3、试剂配置
牛血清清蛋白标准液结晶牛血清清蛋白或酪蛋白，预先经微量凯氏定氮法标定该蛋白质的百分含量或者根据牛血清清蛋白的消光系数是6.6来计算其百分含量。然后根据该蛋白的纯度配置成浓度为100ug/ml的蛋白溶液。
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