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触酶试验

关于触酶的实验做法

触酶试验（Catalase test），是关于触酶的一个实验做法。大多需氧和兼性厌氧菌均产生过氧化氢酶，但链球菌属阴性，故常用此试验来鉴定。分枝杆菌的鉴别则用耐热触酶试验，结核分枝杆菌为阴性，戈氏分枝杆菌和地分枝杆菌为阳性。

原理
触酶又称过氧化氢酶，具有过氧化氢酶的细菌，能催化过氧化氢成为水和原子态氧，继而形成氧分子，出现气泡。
试剂药品
1.50m mol/l pH7.0的磷酸缓冲液
2.0.3% H202:吸0.5ml 30% H202加入pH7.0的磷酸缓冲液至 50ml
3.0.2% 愈创木酚 :秤0.2g愈创木酚加入pH7.0的磷酸缓冲液至 100ml
实验步骤
酶液的制备
1.称取叶片 0.25g ，加入5倍量的（M/V）pH7.0 的PBS冰浴研磨 15000r/min
离心15min取部分上清液经适当稀释后用于酶活性测定。
2.CAT活性的测定
在3ml的反应体系中，包括0.3% H2021ml, H20 1.95ml, 最后加入0.05ml酶液
启动反应，测定波长240nm处的OD降低速度。将每分钟OD减少0.01定义为1个活力单位。
3.POD活性的测定
在3ml的反应体系中，包括0.3% H2021ml, .0.2% 愈创木酚0.95ml,pH7.0的PBS 1ml，最后加入0.05ml酶液启动反应，记录470nm处OD增加速度。将每分钟OD增加0.01定义为1个活力单位。
4. 用考马斯亮蓝 G-250法测定蛋白含量.
结果
若立即出现大量气泡为阳性。无气泡为阴性。
应用
大多需氧和兼性厌氧菌均产生过氧化氢酶，但链球菌科阴性，故常用此试验来鉴定。此外，金氏杆菌属的细菌也为阴性。分枝杆菌的鉴别则用耐热触酶试验，结核分枝杆菌为阴性，戈氏分枝杆菌和地分枝杆菌为阳性。
注意事项
①3%H2O2溶液要新鲜配制。
②不宜用血琼脂平板上生长的菌落，因红细胞含有触酶，可致假阳性反应。
③取对数生长期的细菌。
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