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心肌酶谱

生物学术语

心肌酶谱是对心肌酶检查，检查心肌酶主要是确定心肌缺血坏死或细胞膜通透性。

简介
1.血清酶总论：P232
乳酸脱氢酶（LDH）、谷草转氨酶（AST）、肌酸激酶（CK）、肌酸激酶同工酶（CK-MB），α－HBD　COOH　COOH
α-酮戊二酸 丙氨酸 谷氨酸 丙酮酸
eg：转氨酶、已糖激酶、磷酸化酶
3.水解酶：催化底物之间发生水解反应的酶类
eg：淀粉酶、蛋白酶、脂肪酶、磷酸酶
ALP
对－硝基苯酚磷酸盐对－硝基苯酚+磷酸盐
水解
4.裂解酶类：催化底物移去一个基因而留下双键的反应或逆反应的酶类。
eg：碳酸酐酶，醛缩酶
5.异构酶类：催化各种同分异构体之间互相转化的酶类
eg：磷酸已糖激酶，消旋酶
磷酸已糖激酶
6－磷酸葡萄糖－磷酸果糖
6.合成酶类（连接酶类）：催化两分子底物合成－分子的化合物，同时必须偶联有ATP磷酸键断裂。
命名
1.习惯命名法：根据酶来源，催化反应性质及底物来命名。
底物：淀粉酶，蛋白酶
性质：脱氢酶、转移酶
来源：胰淀粉酶、胃蛋白酶
底物+性质：谷草转氨酶
2.系统命名法：酶反应底物、性质均要列出，各底物间以“：”隔开
编号：（1）1为氧化还原酶类
2为转移酶类
3为水解酶类
4为裂解酶
（2）反应作用的位置，即可用于哪个基因
1.1 －CH－OH
1.2 －C=0
1.3 －C=CH
1.4 －C=NH
1.5 －CH－NH2
1.6 NADH、NADPH
（3）
1.1.1 氯化还原酶 CH－OH 受体：NAD+ NADP-
1.1.2 氯化还原酶 CH－OH 受体：细胞色素
1.1.3 氯化还原酶 CH－OH 受体：分子氧
去路
（一）血清酶的排泄：P234
1.尿路：是血清中低分子量酶类主要去路
2.胆汁不是血清酶排泄途径
（二）肝或网状内皮系统对血清酶的清除：
肝脏对以酶原形式存在的酶类有消除作用
（三）酶蛋白在血管内的失活和分解：
（四）转入其它体液
活性单位
（一）酶的活性单位：在规定条件，每分钟催化1umol的基质发生转化所需要的酶量。
规定条件包括：温度、PH、缓冲系统、基质浓度及辅助因素
（二）酶的单位计算
1.根据标准计算：
（U/L）酶活力单位=A样品/A标准×C标准×Vt/Vs×1/t×1000
总体积-样品+基质
2.根据反应底物的消光系数：
酶活力=A样品/ξd×Vt/Vs×1/t×1000
消光系数 比色杯厚度
（三）血清酶的生理差异：
1.性别：男＞女
2.年龄：儿童 磷酸酶＞成人 婴儿 LDH 2倍成人
3.进食：对酶活力本身无影响，但可影响比色时的浊度
4.活动：
5.妊娠：ALT、LDH、ALP↑
改变机制
（一）合成异常：P238
1.合成减少
2.合成增加
（二）酶从损伤细胞中释放增加：
是疾病时大多数血清酶↑的主要机制
（三）其它机制：
肾衰→尿少→ 血淀粉酶↑
药物，毒物可作为酶的抑制剂
2.AST的测定：
AST 谷草转氨酶（GOT）
天门冬氨酸氨基移换酶
一、AST分布：
广泛分布于人体各组织、器官中，主要在心、肝、骨骼肌、肾、胰、脾、肺、RBC中。其中以心肌cell含量最丰富。
主要存在线粒体中（M－AST）。胞浆中（C－AST）仅占12%，是可溶性的正常血清中AST很少，只有上述组织发生病变
时，才释放入血。
方法学
（一）赖氏比色法：P1151.原理：
COOH COOH COOH COOH
（CH2）2 + CH2 AST （CH2）2 + CH2
C=O HC-NH2 37℃ HC－NH2 C=0
COOH COOH COOH COOH
酮戊二酸 天门冬氨酸 谷氨酸 草酰乙酸
COOH CH3
CH2 柠檬酸苯胺 C=0+CO2
C=0 脱羧 COOH
COOH
丙酮酸
CH3
C=0 + →丙酮酸－2.4－ = +H2O
COOH 硝基苯腙
2.4－二硝基苯肼 酸性，草黄色，加碱，棕红色
与标准浓度丙酮酸生成的苯腙比色（505nm）
2.正常参考值：8-28u
3.注意事项
（1）溶血标本不能用于AST测定，因为RBC中AST是血清10倍。
（2）M－AST、C－AST理化性质，Ag性均不同，由不同基因控制，但催化相同反应，是同I酶
（3）赖氏比色法简易性，相对准确性，所以是普及的原因
（4）难以确定在酶反应期内，产物的生成与时间成正比。
草酰乙酸是AST竞争抑制剂，随反应进程，产物，酶反应不断。
（5）显色反应及底物浓度问题。
酮戊二酸也可与2.4－二硝基苯肼反应，产生另一棕色苯腙，使AST测定假阳性增高。
为了减少其干扰，波长选在490-530nm，此时丙酮酸为－酮戊二酸2倍
2.4－二硝基苯肼在碱性溶液中也可呈色，使吸光度伪性增高。
（6）A、偶联转氨作用：
ALT
丙酮酸+谷氨酸丙氨酸
所以肝疾病AST、ALT同时，使丙酮酸消耗，AST测定结果减低。
B、产物旁路
乳酸
LDH ↑NADH+H+
丙酮酸
↑
α-酮戊二酸+天门冬aa AST 草酰乙酸+谷aa.
↓MDH+NADH+H+
苹果酸
所以受LDH、MDH干扰，使AST测定结果减低
（二）酶偶联一些外连续监测法：
1.原理：L－天门冬aa.+α-酮戊二酸 AST 草酰乙酸+谷aa.
草酰乙酸+NADH+H+ MDH L－苹果酸+NAD+
340nm
吸光度下降值，计算AST活力
2.参考值：男＜40u/L 37℃
女＜35u/L 37℃
3.注意事项：
（1）采血后立即分离血清，避血溶血
血清与血块不可长时间设置在一起
（2）血清，室温4-8h，2-6℃ 7d -20℃ 8月 活力不变
（3）抗凝剂血浆：
EDTA、2Na，肝素对AST无抑制作用
不能用草酸盐抗凝剂，因为可抑制AST活性
（4）AST浓度过高，稀释重做。
（5）不存在偶联转氨作用和产物旁路问题
（6）不存在 酮戊二酸干扰，可适当提高底物浓度使反应完全
（7）底物中存在谷氨酸脱氢酶（GLDH）
α-酮戊二酸+NADH+H++NH3 GLDH 谷aa.+NAD++H2O
消耗NADH+H+，使结果伪性增高。
（8）轿清中丙酮酸LDH
丙酮酸+NADH+H+ LDH 乳酸+HAD+
消耗NDAH+H+，使结果偏高
（9）在指示酶作用有，草酰乙酸可自动脱羧生成丙酮酸，使结果偏低。应加LDH，使之成为乳酸，从而更加准
确反映AST活力。
所以MDH、LDH共同作为指示酶
三、临床意义：
1.AST在心肌中含量最多，所以在急性心梗时6-12h↑，48h达高峰，3-5d恢复正常
2.急性肝炎，手术后，药物中毒，AST明显↑
肝Ca、慢性肝病，心肌炎，AST中度
肌炎，胸膜炎，肾炎，AST轻度
3.急性肝炎，AST，ALT同时↑，可达正常值10-30倍，黄疸前期就已↑，有助于临床早期诊断。
3.AST同I 酶：
<黄>血清酶测定时诊断心梗的意义：
心肌C、肝C出现实质性损害　M－AST　C－AST↑
M－AST↑对肝病预后有一定诊断意义
心梗M－AST↑　所以M－AST越↑，心梗并发心衰的发病率、死亡率越↑，尤其推测死亡率方面意义更大。
4.血清乳酸脱氢酶的测定：　原理　PH对其影响
LDH　糖酵解酶，氧化还原反应
有五种同I酶LDH1－LDH5
一、LDH分布和特点：
广泛分布，主要在肾，其次心，骨骼肌，其它肝、脾、胰、肺，上述组织病变，血清中LDH。主要催化以下反应：
L－乳酸+NAD+　丙酮酸+NADH+H+
PH碱　正反应（L－P）
PH中性　逆反应（P－L）
二、方法学
（一）比色法：P122
1.原理：L－乳酸+NAD+　LDH　丙酮酸+NADH+H+
PH8.8
丙酮酸+2.4－二硝基苯肼　→　丙酮酸－2.4－二硝基苯腙
酸 草黄色
加NaOH　棕红色
颜色越深，酶活力越大
2.参考值：225-540u/dL
3.注意事项：产物生成量与反应时间不成比例
（1）标本严禁溶血　因为RBC内LDH活力是血清内的100倍。
（2）LDH受重金属盐、EDTA、草酸盐的抑制。最好用血清标本
（3）血清标本2-6　数天，室温48h
（4）准确性和重复性在酶学检验中最差，因为五种同I酶与底物结合能力不同，最适反应条件不同，在病理
LDH组成差异大，所以很难找出LDH最适反应条件。eg：心梗LDH1↑，肝病LDH5↑
（5）结果＞2500u/dL，将标本稀释重做。
（二）连续监测法（酶法）：P120
1.原理：L－乳酸+NAD+　PH8.8-9.8　丙酮酸+NADH+H+
逆反应比正反应速度快2-3倍　所以反应偏向左侧，多用P－L
LDH
丙酸酸+NADH+H+乳酸+NAD+
PH7.4
340nm处监测，吸光度下降幅度与LDH成正比。
2.参考值：240-460u/L 37℃
3.注意事项：
（1）逆反应优点：
a.试剂用量少，所需NAD+，只是L－P所用NADH+H+的3%，样品少
b.单位时间内吸光度变化大，逆反应线性范围较大，酶促反应速率比正反应快3倍，利于测定。　时间短
c.酶活力随时间的线性关系较长
（2）正反应优点：
a.NADH+H+比NAD+稳定，价格低，易得到纯品。
底物L－乳酸与逆反应底物丙酮酸稳定
b.L－乳酸对LDH的抑制低于丙酮酸对LDH的抑制
（3）连续监测法可利用正、逆反应，优于比色法。
（4）金属离子的存在可以降低NAD+稳定性
试剂中可加入EDTA，使EDTA络合金属离子，增加NAD+稳定。
（5）NAD+不稳定，产生对LDH有抑制作用的物质。在碱性液中比在酸性液中稳定，在Tris缓冲液中比在磷酸
盐缓冲液中稳定。
（6）某些批号的NADH+H+还有LDH的物质，使用前检查NADH+H+质量，NADH+H+溶于Tris缓冲液，分别在
260nm和340nm测吸光度，应2.3，说明含有在260nm处有吸收峰的杂质，如NAD+、腺苷。
（7）α－酮丁酸，羟基丙酮酸、乙醛酸可代替丙酮酸作底物。
（8）标本不能溶血
三、临床意义：
1.LDH↑：急性心梗、骨骼肌损伤、某些肝炎、白血病、肝硬化、阻塞性黄疸及恶性肿瘤。
2.心梗：12-24h，LDH↑，48-72h达高峰，1-2W后恢复正常
3.恶性肿瘤晚期LDH，恶性肿瘤引起的胸腹水中LDH↑
4.慢性肾小球肾炎、SLE、糖尿病肾病等病人中，尿LDH可达正常人3-6倍，尿中含多种抑制LDH活性物质，如尿素，
小分子肽类。
低PH值也可抑制LDH活性。
5.尿毒症患者LDH正常，透析后LDH↑，因为体内尿素较高
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