皮试

临床最常用的特异性检查

皮试是皮肤（或皮内）敏感试验的简称，是临床最常用的特异性检查。某些药物在临床使用过程中容易发生过敏反应，如青霉素、链霉素、细胞色素C等，常见的过敏反应包括皮疹、荨麻疹、皮炎、发热、血管神经性水肿、哮喘、过敏性休克等，其中以过敏性休克最为严重，甚至可导致死亡。

定义

为了防止过敏反应的发生，特别是严重过敏反应的发生，规定一些容易发生过敏反应的药物在使用前需要做皮肤敏感试验，皮试阴性的药物可以给病人使用，皮试阳性的则禁止使用。这些需要做皮试的药物被称为皮试药物。

皮肤试验是借助抗原、抗体在皮肤内或皮肤上的反应进行免疫学检测的方法。根据反应机制不同可分为两大类，一类为中合反应皮肤试验，可观察机体的体液免疫状态；另一类为超敏反应皮肤试验，用来检测机体的超敏反应和细胞免疫状态。锡克试验是衡量人体对白喉易感性或免疫程度的一种皮试。方法是注射一定量的白喉毒素于受试者前臂屈侧皮内。受试者如无免疫力，24～48小时，局部皮肤出现红肿，直径在1～2厘米者为阳性反应。相反，受试者如有免疫力，其血清中含有足量的抗毒素抗体，能中和注入的毒素，局部不出现红肿，为阴性反应。此试验除用来测定机体对白喉的易感性以外，还可检测白喉预防接种后是否产生免疫力。其实质是毒素、抗毒素的体内中和反应。I型变态反应（见变态反应）皮肤试验是变应原与特异性抗体IgE（免疫球蛋白E）在皮内进行的一种反应。引起I型变态反应的抗原，经注射或划痕后，可在10～20分钟内引起红肿反应，如青霉素皮试，异种动物血清皮试等。本试验阳性者表示对该抗原过敏

准备工作

首先应当制备试验用抗原，如有合格商品可直接购买。可以作为变应原的物质种类繁多，例如动物皮毛、家禽羽毛、鸽粪、昆虫、螨类、真菌、花粉、杂草、物理粉尘和各种食品等都可能成为变应原。不同抗原的制备方法不同，但一般包括以下几个步骤：①收集原料；②粉碎与匀浆；③脱脂与提取；④过滤与分离；⑤分装保存。分装保存之前应对提取产物进行鉴定。

首先必须经过无菌试验、急性毒性试验和热原检查，保证提取产物无明显的毒副作用；还要测定产物的蛋白含量，用凯氏定氮法或磷钨酸沉淀法标定出总氮单位或蛋白氮单位。变应原的范围很广，难以做得完全，所以查找变应原需依靠患者的病史和医师的经验以将可疑范围缩小，学样成功的机会就大得多。

一般医院和卫生所都能做药物过敏试验，多在注射室完成；防疫部位在一些免疫接种之前有时也要做皮肤试敏；其余的均在变态反应科或检验科的专门实验室。实验室应有专人负责，除具备各种专用试验器材之外，还应备有意外抢救的药品及设施。试验部位应清洗干净，严格消毒，以免皮肤的不洁物引起非特异性反应或感染。当皮肤患湿疹、感染、皮炎或外伤时不宜进行皮肤试验。正在或近日服用免疫抑制剂或抗组胺药物者也不宜进行皮肤试验。

类型及方法

皮肤试验的最常用部位是前臂曲侧，因此处皮肤较为光滑细腻，而且便于试验操作和结果观察。按正规作法，左右两臂一侧作试验，另一侧作对照。需要时也可选用上臂或背部皮肤。具体试验方法可分为皮内试验（intracutaneoustest）、挑刺试验（pricktest）和斑贴试验（patchtest）。

皮内试验

将试验抗原与对照液各0.02～0.03ml用皮试针头分别注入皮内（不是皮下），使局部产生一个圆形小丘。当同时试验多种抗原时，相互间至少间隔4cm，以免强烈反应时互相混淆结果。皮内试验的敏感性比其他皮肤试验高，所用抗原应适当稀释，以免出现严重反应；当高可疑性抗原出现阴性结果时，应逐渐加大抗原浓度进行重复试验。皮内试验是最常用的皮肤试验，应用范围也很广，几乎各类抗原及各型反应都可用皮内试验进行测定，只是不同类型的反应观察结果的时间和判定结果的标准不所不同。

挑刺试验

也称点刺试验或刺痕试验。将试验抗原与对照液分别滴于试验部位皮肤上，用针尖透过液滴或在皮肤上轻轻地挑刺一下，以刺破皮肤但以不出血为度；1min后拭（吸）去抗原溶液。同时试验多种抗原时，千万注意不要将不同的抗原液交叉混合，以免出现假阳性。挑刺试验主要用于型变态反应，该法虽比皮内试验法敏感性稍低，但假阳性较少，与临床及其他试验的相关性较强。划痕试验（scratchtest）是挑刺试验的一个变型，用三棱针或注射器针头在皮肤划一条或多条约1cm长的创痕。因为划痕的轻重与长短难于掌握一致，故不常用。

斑贴试验

将试验抗原直接贴敷于皮肤表面的方法。试验抗原为软膏时可直接涂沫在皮肤上；如为固体物时可用蒸馏水混合或浸湿后涂敷于皮肤上；如为水溶液则浸湿纱布后敷贴于皮肤上。所用抗原浓度以不刺激皮肤为原则，涂敷范围以0.5～1cm为宜。涂敷后盖以油纸或玻璃纸，用纱布或绷带固定；如有明显不适感可随时打开查看，并进行适当处理。斑贴试验主要是检测Ⅳ型变态反应，敏感程度虽然不太高，但假阳性较少，结果的可信度大。

判定分析

1．Ⅰ型变态反应在抗原刺激后20～30min内观察结果。挑刺试验的阳性反应以红晕为主，皮内试验的阳性反应则以风团为主，判定标准见表1。

表1 速发型皮肤试验的结果判定标准

反应程度皮内试验挑刺试验

－无反应或小于对照无反应或小于对照

+ 风团3～5mm，红晕<20mm 红晕>对照，≤20nm

++ 风团6～9mm，伴红晕红晕≥20mm，无风团

+++ 风团10～15mm，伴红晕红晕伴有风团

++++ 风团~15mm，红晕伴伪足红晕伴伪足和风团

2．Ⅳ型变态反应在接触抗原后48～72h内观察结果。皮内试验的阳性结果以红肿和硬结为主，斑贴试验的阳性结果以红肿和水疱为主。判定标准见表2。

表2 迟发型皮肤反应试验的结果判定标准

反应程度皮内试验斑贴试验

－无反应或小于对照无反应或小于对照

+ 仅有红肿轻度经肿，搔痒

++ 红肿伴硬结明显红肿，时有红斑

+++ 红肿，硬结，水疱红肿伴豆疹，水疱

++++ 大疱或（和）溃疡红肿，水疱伴溃疡

有时候，机体对某变应原可能同时存在多种类型的反应。例如在做青霉素皮内试验时，30min内观察呈阴性反应，但在5～8h可能会出现Ⅲ型变态反应，反应的外观现象介于Ⅰ型与Ⅳ型变态反应之间；甚至还可能出现型变态反应。

3．假性结果在一定条件下，皮肤反应的结果可能与机体的实际情况不符，即出现假阳性或假阴性等不真实的结果。

出现假阴性的常见原因有：

①试验抗原的浓度过低，或者因各种原因失效；

②试验时正服用免疫抑制剂或抗组胺药物（后者可通过设立组胺阳性对照而判断出来）；

③操作误差，例如皮内试验时注射过深进入皮下，注入抗原量过少等；

④皮试季节选择不当，例如花粉季节过后，抗花粉抗体水平可下降。

出现假阳性的常见原因有：

①试验抗原不纯，在提取、配制，甚至在试验过程中被其他抗原污染，引起交叉反应；

②试验溶液配制不当，过酸或过碱都会对皮肤产生非特异性刺激；

③皮肤反应性过强，例如被试者患有皮肤划痕症，或者有既往过敏的痕迹等；

④操作不当，例如注入少量空气也可出现假阳性。

应用与评价

皮肤试验属于活体试验，虽然影响因素众多，却能反应机体各种因素综合作用的实际免疫状态；并且简单易行，结果的可信度大；这些优点是其他方法难以替代的，所以在临床和防疫工作中都经常应用。

1．寻找变应原变态反应防治的重要原则之一是回避变应原，而回避的前提是明确变应原，确定变应原的常用方法便是各种类型的皮肤试验。例如支气管哮喘和荨麻疹等均可用皮肤试验来。但食物过敏与皮肤试验的相关性较差，这可能是因为食物的抗原提取液与肠吸收的物质有所不同，或食物过敏并非IgE所介导；而且，食物过敏的变应原容易发现，一般不必作皮肤试验。

2．预防药物或疫苗过敏对患者首次注射某批号的青霉素、链霉素或其它易过敏药物之前，必须做过敏试验；如果患者呈阳性反应（即使是可疑阳性），就应更换其他抗生素。注射导种抗血清（例如抗破伤风血清和抗狂犬病血清）前也必须做过敏试验，如果呈阳性反应就需要换用精制抗体；或进行脱敏治疗（少量多次注射，使抗原逐渐中和血液中的抗体）。

3．评价宿主细胞免疫状态在可疑免疫缺陷病、肿瘤或器官移植进，了解患者的细胞免疫状态对疾病诊断和预后判断都有重要意义。这种情况下可以使用共用抗原结核菌素（OT或PPD）或双链酶（SD-SK）进行皮肤试验；或使用人工合成的二硝基氯苯（DNCB）或二硝基氟苯（DNFB）等先进行致敏再作皮肤试验，这样可消除抗原接触史不同所致的误差。

4．传染病的诊断对某些可疑的传染病，用某种病原体的特异性抗原进行皮肤试验可以起到诊断或鉴别诊断的作用。例如对布氏菌病和软下疳等细菌感染、对某些病毒感染和真菌感染、以及某些寄生虫感染均有一定的意义另外，还有一些反应机制不同于变态反应的中和性皮肤试验，例如诊断白喉的锡克（Schick）试验和诊断猩红热的狄克（Dick）试验等。

需要皮试的药物

需要做皮试的药物分为两种类型：一类是按规定必须做皮试的药物；一类是特定情况下才需要做皮试的药物。必须做皮试的药物还包括两种情况：一种是常规皮试药物，包括青霉素类（注射和口服剂型）、链霉素、结核菌素、破伤风抗毒素血清、盐酸普鲁卡因、细胞色素C、有机碘造影剂、门冬酰胺酶。无论药品说明书中是否说明要做皮试，这些药物在使用前必须做皮试。另一种是容易过敏的药品，而药品说明书中又要求做皮试的药品（非常规皮试药物）如：中诺嘉林（头孢噻酚钠；力芬也是头孢噻酚钠，但说明书没有要求做皮试）、清开灵（冻干粉针）、益替欣（头孢替唑钠）、糜蛋白酶、维生素B1注射液、胸腺肽注射液（过敏体质者需做皮试）。

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