肝细胞移植

医学名词

肝细胞移植（HCT），就是对获得完整正常的肝脏或手术切下的部分肝组织，进行体外分离纯化，将分离纯化的肝细胞植入体内，恢复或重建肝功能，暂时性代谢性支持病人等待肝脏移植或自行恢复患者的疾病不需进行原位肝移植。肝细胞体内移植经过20余年的基础与临床应用研究，被证明是一项经济、有效、微创的治疗终末期肝病和遗传性肝脏代谢性疾病的治疗措施。只有美国、日本等发达国家能开展这项手术，国内尚处于基础研究阶段。

发展历程

1993年Mito等人第一次报道了肝细胞移植在治疗慢性重型肝炎中的应用。1998年Fox等人报道了应用该方法治疗小儿Crigler-Najjar Ⅰ型疾病，18个月后胆红素水平降低了60%。1998年美国FDA6880条款通过了人类肝细胞体内移植可作为终末期肝病的一项有效的治疗技术，并于当年通过了美国FDA认证。国内尚无任何一家医院开展此项医疗技术。302医院具备掌握该技术的必备人员即在匹兹堡大学器官移植中心从事该技术基础和临床应用博士后工作的杨永平同志回院工作，具有通过GMP认证的生产车间和必需设备，并且完成了肝细胞移植所有临床前实验工作。该技术通过总后卫生部组织的专家评审，现应用于临床，服务终末期肝病和遗传性肝脏代谢性疾病的患者。

移植方法

Mito等率先将肝细胞移植应用于治疗肝衰竭的患者，其方法是：切除三段肝左叶，分离肝细胞，即刻注射10000000~-600000000个肝细胞于患者脾脏，随访患者症状的改善情况。Liu等则是将肝细胞和骨髓下细胞用胶囊共同包裹后进行移植，然后评价移植后其去除氨的能力及治疗小鼠高胆红索血症的效果，结果证明：与单独的肝细胞移植相比，用胶囊共同包裹后进行移植的方法，不仅在体外可增强去除氨的能力，而且还可降低体内总胆红素水平，移植成功的几率也大大增加。

移植部位

理论上，肝脏本身的微环境及门静脉血中的营养成分均对植入的肝细胞有益；门静脉内或肝实质内应是供体肝细胞理想的植人场所。国外有些实验发现:门静脉内移植会导致严重的肝损伤和广泛的肝坏死，移植早期实验动物的病死率明显增加这可能是由于植人的肝细胞直接阻碍受体肝脏的血液供应，引起肝脏的梗塞和坏死。这就严重限制了肝细胞的植人数觉，直接降低了其对受体的代谢支持功能。腹腔内HcT，由于技术简单及可反复多次进行等优点故首先被选用于 HCT。先期腹腔内移植显示出令人鼓舞的短期疗效但腹膜腔无法为肝细胞的长期附着和生存提供足够支持，移人的肝细胞寿命短暂。改进后采用的联合移植肝细胞与非实质细胞或自体基质，或以胶原包裹或藻酸盐微囊化肝细胞均可延长肝细胞在腹膜腔内的生存时间。近来，Rahman，等四用联合包裹HepG细胞和支持细胞的方法延长了移植细胞在鼠腹膜腔的生存时间微囊化方法与局部免疫抑制的结合可能是一种有价值的HCT策略。

脾实质内HCT。脾脏已被认为是HCT的最佳部位。植人脾内的肝细胞可长期存活、增殖，并保持肝细胞的形态和功能上。虽然肝细胞移植人休内其他部位如胰腺、肺脏、肾脂

肪囊、皮下组织、肌肉等处也有一定的代谢支持功能，但均不如脾内移植优越。因此脾实质的移植可能是未来最有前途的移植选择。

细胞来源

异种肝细胞

这种移植具有来源广泛的显著优点。最常用的异种肝细胞源是猪肝，它能提供与人肝结构相似、功能相近的肝细胞。Nishitai等在免疫缺陷鼠的脾脏内移植猪肝细胞，发

现新鲜分离的猪肝细胞较之培养后、4℃保存或冻存后的猪肝细胞在移植后具有更好的活力和分泌功能。提示新鲜分离的猪肝细胞是首选的异种肝细胞源。

成熟的人肝细胞

这是最理想的细胞来源。Chen等用含肝细胞生长因子变异体的培养基培养人肝细胞作动物对照实脸，证实在体外培养过程中该变异体能维持人肝细胞的特异性功能。

胎肝细胞

胎肝细胞是由流产胎儿肝脏分离所得的肝细胞及其前体具有分化增殖能力强、免疫原性弱及更能抵抗低温贮存损伤等优点。

永生化肝细胞株

它是一种具有良好特征性的可移植肝细胞，可以解决增殖难题，具有成为取之不蝎的潜力。国内有学者以重组质粒SV40LT/pcDNA3.1经脂质体转染来源于正常人肝细胞，成功构建水生化人源性肝细胞系HepLL表明HepLL 具有正常人肝细胞的形态特征和生物学功能。

肝干细胞

由Peteoen于1999年最先提出分为肝源性和非肝源性两大类。较为明确的是前者，主要包括肝卵圆细胞;后者包括成体肝细胞和胚胎干细胞两大类。关于成体干细胞的研究主要聚焦干骨髓干细胞向肝细胞的分化研究。国内也开展很多关于骨髓源性肝干细胞方面的研究，蔡云峰等建立动物模型应用免疫磁珠法分离骨髓干细胞，在休外培养诱导分化，免疫组化技术检测，证明β2:m一细胞在体外具有向肝细胞分化的能力。

临床应用

HCT现主要用于治疗以下疾病:

(1)各种原因引起的急、慢性肝衰竭，如肝肿瘤、终末期肝硬化；

(2)肝代谢疾病，如a一1抗胰蛋白酶缺乏；

(3)肝脏疾病的基因治疗，如家族性高胆固醇血症。

优点

大量的临床、实验研究表明，对于患有致命性肝脏疾病的治疗，HCT较OLT具有以下优点：

(1)HCT的创伤对受体的打击相对较小，易操作，安全性好；

(2)OLT供体缺乏，HCT可部分解决供体短缺的问题；

(3)HCT排异反应低于OLT；

(4)植入的肝细胞能较快地发挥合成、解毒和促进胆红素排泄等作用；

(5)HCT还可通过复杂的体液分子机制，促进宿主残余肝细胞增殖和肝功能的恢复；

(6)肝脏随着肝细胞的再生而发挥其正常功能；

(7)具有基因修饰的可能性。

存在问题

HCT历经30余年的不断研究，已从动物模型阶段开始进人初步临床试验。虽然HCT是当前热点之一，但在其常规用于治疗人类疾病之前还有许多有待解决的向题：

(1)移植肝细胞所需数量大，如何才能从切取的肝脏上最大限度地获得分离的肝细

胞，如何大量培养和保存肝细胞，怎样从有病变的肝脏中分离和纯化肝细胞；

(2)肝细胞低温冻存复苏后存活率不高，功能受到不同程度影响；

(3)如何建立细胞耐受和抑制排斥反应的新策略；

(4)体外培养并大量扩增原代人肝细胞的技术能力有限；

(5)HCT适宜的移植部位、数量和方式，在病理机体情况下，哪些器官或部位最适合移植肝细胞；

(6) HCT的指征和不同程度应用的剂量以及临床效用的监侧；

(7)HCT基因治疗适宜载体的构建。

成功案例

2004年10月31日，解放军302医院对外宣布，该院多名专家联手在10月29日为一名来自辽宁的48岁患者成功实施了肝细胞体内移植手术。经过两天的严密监测，患者生命体征正常，身体恢复良好，无任何急性排异反应。据了解，这是迄今中国开展的首例肝细胞移植手术。此次手术的成功，标志着中国在治疗急慢性重型肝炎及遗传性肝脏代谢性疾病方面获得了重大突破，表明中国在这一技术领域上已达到国际先进水平。

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